实验介绍 :
绝 对定量是通过样品的Cq值和标准曲线进行比较实现的。首先为了建立标准曲线,需要已知拷贝数浓度的标准品,对标准品进行5次以上的连续梯度稀释,将稀释的标准品进行实时荧光定量PCR扩增,根据各样品的拷贝数浓度及相应的Cq值绘制标准曲线,得到线性方程Cq= -klgX0+b,其中X0为起始模板量。然后将未知样本的Cq值与此标准曲线进行比较,确定其拷贝数浓度。
实验流程:
取材-DNA提取- 稀释标准品-QPCR扩增-数据分析-发报告
结果展示:
送样运输要求:
1)动物组织:100 mg(黄豆大小),最少50 mg(绿豆大小),脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加,干冰运输。
2)细胞:1×10个细胞。细胞沉淀或加入trizol的细胞样本(不要直接运输加trizol的细胞培养皿),干冰运输。
3)全血:最少1mL新鲜血液EDTA抗凝管,-20°℃运输。
4)植物:新鲜的叶、果肉、种子等最少需100mg,干冰运输。
5)质粒和基因组DNA,干冰运输。