PI染色实验服务

实验介绍  

PI（碘化丙啶，Propidium Iodide）染色是一种经典的细胞核荧光染色技术，通过特异性嵌入双链DNA/RNA，实现对细胞核的标记。由于PI无法穿透完整细胞膜，常与膜通透性检测联用，广泛应用于：  

-细胞凋亡/坏死分析（区分死/活细胞）  

-细胞周期检测（DNA含量定量）  

-肿瘤药效评估（增殖抑制率计算）  

本服务采用高纯度PI试剂，结合流式细胞术或荧光显微镜平台，提供精准的定量与定性分析。

实验流程  

1.样本制备  

   - 客户提供：细胞悬液（≥1×10⁶ cells）或组织切片  

   - 可选处理：细胞固定/透化（乙醇或低渗缓冲液）  

2.染色操作  

   - PI工作液配制（终浓度 5–50 μg/mL，避光）  

   - 样本与染液共孵育（15–30 min，室温避光）  

3.核酸酶处理（可选）  

   - 加入RNase A（终浓度 100 μg/mL）消除RNA干扰  

4.检测分析  

   -流式方案：488 nm激发，＞620 nm发射波长检测  

   -成像方案：荧光显微镜下观察红色核荧光（Ex/Em=535/617 nm）  

注意事项  

1.样本活性  

   - 新鲜样本需在24 h内处理，避免细胞自溶导致假阳性  

2.避光操作  

   - PI具光敏性，全程需在暗环境中进行  

3.对照设置  

   - 必须包含：空白对照、阳性（死细胞）对照  

4.干扰排除  

   - 避免使用含酚红的培养基（背景荧光干扰）  

   - 多色实验时需验证光谱重叠（PI与FITC/Percp存在串扰）  

结果展示  

-流式数据：  

   细胞周期分析图（G0/G1, S, G2/M期比例）  

   凋亡细胞定量（PI+ Annexin V- 早期凋亡；PI+ Annexin V+ 晚期凋亡/坏死）  

-成像数据：  

   荧光显微图像：死细胞核呈强红色荧光，活细胞无着色  

   组织切片中坏死区域定位  

服务优势  

-灵敏度：可检测＜5%的亚G1期凋亡细胞  

-稳定性：批内重复CV值＜5%  

-兼容性：支持多色荧光共标（如Hoechst/Annexin V联用）