实验原理

胶原纤维染色如苦味酸-酸性品红法和三色染色法,都是利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用而完成鉴别染色的。Van Gieson氏染色中,为什么胶原纤维呈红色(被酸性品红所染),肌纤维呈黄色(被苦味酸所染)。而Masson氏染色时胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染),肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染),这与阴离子染料分子的大小和组织的渗透性有关。 

可发现红细胞被最小分子的阴离子染料着染，肌纤维与胞质被中等大小的阴离子染料着染,而胶原纤维则被大分子的阴离子染料着染。由此说明了红细胞对阴离子染料的渗透性最小,肌纤维与胞质次之,而胶原纤维具有最大的渗透性。根据组织不同的渗透性能,选择分子大小不同的阴离子染料进行染色,便可把不同组织成分显示出来。

常用作胶原纤维染色的几种阴离子染料的分子量由小到大分别是: 

苦味酸(黄色),分子量,229.11 

橙黄G(橙黄色),分子量452 

丽春红(红色),j女子量,480.42 

酸性品红(红色),分子量,585.53 

苯胺蓝(蓝色),分子量737.72 

亮绿(绿色),分子量792.72 

甲基蓝(蓝色),分子量,799 

因此,在Van Gieson氏法中,苦味酸染红细胞和肌纤维,酸性品红染胶原纤维,而在Masson氏法中,酸性品红或丽春红染肌纤维,而苯胺蓝或亮绿染胶原纤维。染色反应是一个很复杂的过程,胶原纤维染色除上述两个方面外,不排除电子吸附和排斥作用。

胶原纤维和肌纤维的鉴别染色是病理组织制片的一个重要方法,它的染色对病理诊断很有帮助。1.来源于间胚叶的肿瘤,如纤维瘤、平滑肌瘤、横纹肌瘤、神经纤维瘤甚至它们的肉瘤等都产生一定的纤维,这些纤维在H-E染色中都染成红色而难以区别。通过用上述方法染色,一般可区分出该肿瘤组织是胶原纤维源性,还是肌源性,或者是神经纤维源性。对于后者,有时还需加染磷钨酸苏木素来协助诊断。2.在慢性炎症,机化和瘢痕形成中,可随病理过程的发展而出现胶原纤维。在早期,H-E染色切片中的这些纤维往往和纤维蛋白很难鉴别,通过胶原纤维染色则可证实。如慢性肾小球肾炎的肾小球纤维化后,MASSON染色呈蓝色。大叶性肺炎或血栓发生机化后,原有的纤维蛋白灶内出现胶原纤维,MASSON染色呈蓝色。风湿性肉芽肿已静止时,阿啸夫氏(Aschoff's。巨细胞消失,病灶内的纤维被胶原纤维取代,MASSON染色也呈蓝色。胃、十二指肠溃疡愈复时,在渍疡底部出现胶原纤维构成的疤痕,慢性阑尾炎时阑尾壁出现的纤维化,肝硬化时胶原纤维的增生,这些用Masson。染色也都染成蓝色。

实验结果展示

胶原纤维呈蓝色；

背景呈红色至紫红色（主要为肌纤维，胞质，纤维素，角质蛋白细胞核等）

红细胞呈水红色。

实验仪器

试剂

耗材：

微波修复盒，玻璃缸，染色架，玻璃烧杯，染色杯，盖玻片

实验步骤

脱蜡

1 将烤箱中染色架上烤好的石蜡切片样本放入二甲苯Ⅰ浸泡20min，

2 将样本移入二甲苯Ⅱ浸泡20min，

3 待样本上的蜡溶解后，将样本转入无水乙醇Ⅰ浸泡5min，

4 将样本转入无水乙醇Ⅱ浸泡5min，

5 用无水乙醇刷洗20s移入水盆中用自来水流水将样本上的酒精冲洗干净。  

染色

1 切片入微波修复盒中的Masson染液1过夜孵育，

2取出切片，拿染色杯用自来水快速水洗至无色；

2 切片入微波修复盒中的Masson染液2（染色前65℃预热30min）中放回烤箱染色3-5min后，拿染色杯用自来水，水洗2-3次；

3 切片入微波修复盒中的Masson染液3染色30s-1min

4 取出切片，稍微沥干，入微波修复盒中的Masson染液4（染色前置于65℃预热30min，用完放回烤箱预热）染色5-20s。

5 切片入1%冰醋酸（需自备）内分化数秒，三缸，每缸分化5-10s

脱水封片

脱水：

切片入微波修复盒中的无水乙醇三缸，每缸5-10s。

切片转入微波修复盒中的正丁醇 10-20s。

封片：

切片入染色缸中的二甲苯（专用）Ⅰ5min

转入染色缸中的二甲苯（专用）Ⅱ5min

放入风口快速吹干后，用中性树胶封片。

染液名称表