蛋白质是生命功能的执行者，而免疫组化实验（Immunohistochemistry, IHC）是一种在组织切片上原位检测特定蛋白质表达与定位的强大技术。通过抗原-抗体特异性结合，结合酶促显色或荧光标记，IHC能够在显微镜下直接观察目标蛋白在细胞或组织中的分布、丰度及亚细胞定位，将分子信息与组织形态学完美结合。
从肿瘤标志物检测到信号通路研究，从临床病理诊断到基础机制探索，免疫组化实验已成为生物医学研究中不可或缺的工具。然而，高质量的IHC结果依赖于每一个环节的精准把控：抗体的选择与验证、抗原修复的条件优化、染色体系的标准化、结果的客观判读。
皮诺飞生物免疫组化实验平台，由经验丰富的病理技术团队和专业抗体库支撑，为您提供从样本处理到图像分析的全流程IHC服务，确保每一张切片都能清晰呈现目标蛋白的真实面貌。
我们接受多种类型的样本，并根据样本特点优化处理方案：
石蜡包埋组织样本
人源、动物源（小鼠、大鼠、兔等）组织石蜡块
已切好的石蜡切片（可提供防脱玻片）
新鲜组织固定、脱水、包埋一站式服务
冰冻组织样本
OCT包埋冰冻组织块
已切好的冰冻切片
新鲜组织速冻、包埋、切片服务
细胞样本
细胞爬片、细胞涂片、细胞蜡块
组织芯片
可定制或使用商品化组织芯片进行批量检测
抗体是IHC实验的核心试剂，其特异性直接决定实验成败。我们拥有：
经严格验证的抗体库
覆盖肿瘤标志物、细胞亚型标志物、信号通路蛋白、转录因子、细胞骨架蛋白等数百种常用靶标
每个抗体均经过多组织阳性对照验证，确保染色特异性和灵敏度
抗体定制化筛选
对于罕见靶标或特殊需求，我们协助筛选最优抗体
提供多种克隆号、多种来源的抗体平行测试，推荐最佳选择
阴性/阳性对照设置
阳性组织对照：已知表达靶蛋白的组织
阴性组织对照：已知不表达靶蛋白的组织
一抗替代对照：同型对照或PBS代替一抗，评估背景染色
福尔马林固定、石蜡包埋过程中，抗原决定簇可能被交联掩蔽，需要通过抗原修复暴露抗原位点。我们针对不同抗体特性，提供多种修复方案：
热诱导抗原修复
pH 6.0枸橼酸盐缓冲液：适用于多数核抗原和胞浆抗原
pH 9.0 EDTA缓冲液：适用于对pH敏感的膜抗原和某些核抗原
压力锅修复：高效、均匀加热，适合大批量切片
微波修复：快速、可调节功率
酶消化修复
蛋白酶K、胰酶、胃蛋白酶等，适用于某些对热敏感的特殊抗原
修复条件优化
对抗体说明书未明确或预实验结果不佳的靶标，进行温度、时间、pH值多梯度优化，确保最佳染色效果
显色免疫组化
检测系统：提供EnVision、ABC、LSAB等多种聚合物或亲和素-生物素系统
显色底物：DAB（棕色，最常用，耐光、不溶于有机溶剂）、AEC（红色，可用于双染）
复染：苏木精复染细胞核，也可根据需要不復染或甲基绿复染
荧光免疫组化
荧光染料：FITC、TRITC、Cy3、Cy5、Alexa Fluor系列等
多重标记：可同时检测2-3个靶标，配合DAPI核染
防淬灭封片：使用抗淬灭封片剂，延长荧光保存时间
双重免疫组化标记
在同一张切片上检测两个靶标，可采用不同显色系统（如DAB棕色 + AEC红色）或荧光双标
适用于研究共定位、细胞亚群分析、肿瘤微环境评估等
双色显色IHC
同时检测两个抗原，通常使用两种不同颜色的显色底物（如DAB棕色和AEC红色）
需注意两种抗体的种属来源，避免交叉反应
免疫荧光双标/多标
使用不同荧光染料标记的二抗，可在同一视野下观察多个靶标的共定位关系
结合共聚焦显微镜，可获得高分辨率的共定位图像
TMA组织芯片IHC
适用于大样本量、高通量的生物标志物筛查
一张芯片可同时检测数十至上百例样本，保证染色条件一致，便于批量分析
显微镜观察与拍照
正置/倒置显微镜，明场、荧光模式
高分辨率数码相机，20×、40×物镜拍照
全景扫描仪：将整张切片数字化，便于保存和远程分享
定量分析
阳性率：阳性细胞数占总细胞数的百分比
染色强度：弱、中、强分级，或平均光密度值
H-score评分：综合考虑阳性率和染色强度，公式：H-score = (弱阳性细胞% × 1) + (中阳性细胞% × 2) + (强阳性细胞% × 3)
IRS评分：免疫反应评分，染色强度与阳性细胞百分比乘积
共定位分析：荧光双标图像的共定位系数
我们对抗体质量有近乎苛刻的要求。每一批新抗体入库前，均使用已知阳性组织和阴性组织进行验证，只有染色模式符合预期、背景干净的抗体才会被用于正式实验。对于关键靶标，我们同时储备多个克隆号，以备不时之需。
针对不同抗原特性，我们建立了系统的抗原修复优化流程。对于难检测靶标，我们提供多种修复条件平行测试，直至获得最佳染色结果。我们深知，没有一种修复方案适用于所有抗体，个性化优化才是关键。
从切片脱蜡、水化、抗原修复、封闭、一抗孵育、二抗孵育、显色到封片，每一步均有详细的SOP规定操作时间、温度、试剂浓度等参数，确保批内和批间染色的一致性。
每批染色均包含以下对照：
阳性组织对照：验证抗体在该批次染色中是否正常工作
阴性组织对照：评估背景染色水平
一抗替代对照：使用同型对照或PBS代替一抗，检测非特异性染色
内源性酶/生物素封闭对照：评估内源性过氧化物酶或生物素封闭效果
由经验丰富的病理技术人员和病理医生共同参与结果判读，区分特异性染色与非特异性背景，排除组织边缘、坏死区、挤压区等假象干扰，确保数据真实可靠。
需求沟通：明确检测靶标、样本类型、所需染色方法（单染/双染/荧光）及定量需求
方案设计：根据靶标特性推荐抗体、修复条件、染色体系，提供详细报价和周期
样本准备：指导样本固定、运输，或由我们接收后进行处理
预实验（可选）：对于新靶标或珍贵样本，先进行预实验优化条件
正式实验：按照SOP执行染色，全程质量控制
图像采集与分析：显微镜观察、拍照，根据需求进行定量分析
报告交付：提供完整的实验报告，包括染色条件、抗体信息、原始图像、分析数据及结果解读。常规周期7-14个工作日。
| 应用领域 | 检测靶标示例 | 研究目的 |
|---|---|---|
| 肿瘤研究 | Ki-67, p53, HER2, EGFR, PD-L1 | 增殖活性、预后标志物、靶点表达 |
| 免疫微环境 | CD3, CD4, CD8, CD20, CD68, FoxP3 | 免疫细胞浸润、肿瘤浸润淋巴细胞 |
| 信号通路 | p-STAT3, p-ERK, β-catenin | 通路激活状态、机制研究 |
| 干细胞与分化 | Nanog, Oct4, Sox2, Nestin | 干性维持、分化标志 |
| 神经科学 | NeuN, GFAP, Iba1, Aβ, Tau | 神经元、胶质细胞、病理改变 |
| 心血管研究 | α-SMA, vWF, cTnI | 血管平滑肌、内皮细胞、心肌损伤 |
| 发育生物学 | 各种组织特异性标志物 | 器官发育、细胞谱系追踪 |
Q：免疫组化实验需要多少组织？
A：石蜡包埋组织块需至少3×3×1mm大小，以保证切片后仍有足够面积观察。已包埋蜡块或已切片均可。细胞爬片需提前制备好固定。
Q：一抗必须自己提供吗？
A：不一定。我们拥有丰富的抗体库，常用靶标可直接使用我们的抗体。如需特殊抗体，可委托我们采购，或您自行提供（需提供详细说明书）。
Q：染色背景高怎么办？
A：背景高可能原因包括：一抗浓度过高、孵育时间过长、封闭不充分、内源性酶/生物素未阻断、洗涤不彻底等。我们会通过优化条件降低背景，如调整抗体稀释比、延长封闭时间、增加洗涤次数等。
Q：免疫组化双染如何确保特异性？
A：双染需确保两种一抗来源不同（如小鼠来源和兔来源），二抗分别标记不同酶或荧光素，且无交叉反应。我们使用精心配对的试剂盒，并设置单染对照，确保双染结果可靠。
Q：能否提供染色切片的扫描电子版？
A：可以。我们提供显微镜拍照的TIFF/JPEG图片，也可提供整张切片的全景扫描数字图像（需使用扫描仪，费用另计）。
Q：免疫组化结果如何进行半定量分析？
A：我们提供多种评分方法：①阳性细胞百分比；②染色强度分级（0-3级）；③H-score评分（综合考虑阳性率和强度）；④IRS评分。可根据您的需求选择合适的分析方法。
免疫组化实验是将分子表达与组织形态学关联的核心技术。一张清晰、特异、可重复的IHC染色切片，能为您的机制研究、标志物发现或临床前评价提供关键证据。
无论您需要单个靶标的常规检测，还是复杂的多重标记分析，皮诺飞生物免疫组化平台都能以专业的技术和严谨的态度，为您交付高质量的结果。
立即联系我们的病理技术专家，获取针对您研究靶标的免费实验方案与报价。
