细胞名称：4T1小鼠乳腺癌细胞

细胞别称：4T1；4T1-A

组织来源：乳房

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基：90%DMEM+10%FBS+PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周2-3次

背景简介：4T1细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当4T1细胞注射到BALB/c小鼠中时，4T1细胞会自发产生高转移肿瘤，可转移到肺、肝、淋巴结和大脑，同时在注射部位形成始发灶，诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近，这种肿瘤是人Ⅵ期乳腺癌的动物模型。4T1细胞诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近，可以用作手术后及未手术模型。4T1细胞诱导的肿瘤模型跟其他肿瘤模型相比，由于4T1细胞的抗6-硫鸟嘌噙特性，微小的转移细胞团(少到仅仅1个)也可以在许多远端器官中检测到，没必要数淋巴结或称重器官。

细/胞/形/态

培/养/指/南

4T1细胞复苏步骤

1.将含有1 mL4T1细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀；

2.在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后轻轻吹匀；

3.将所有4T1细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）；

4.第三天换液并检查4T1细胞密度。

4T1细胞传代步骤

如果4T1细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗4T1细胞1-2次。

2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min（视细胞消化情况而定），然后在显微镜下观察4T1细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

3.将4T1细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

4T1细胞冻存步骤

待4T1细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例

1.收集4T1细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，然后进行细胞计数。

2.根据4T1细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

培/养/事/项

1.4T1细胞生长速度快，细胞汇合度越高越难消化，建议分次消化。一次消化至有细胞移动漂浮时终止，再进行二次消化剩余的细胞，尽量消化成单颗细胞，4T1细胞传代第二天有少量细胞团贴壁未展开为正常现象，继续培养细胞会展开；

2.若在培养时出现细胞变圆现象，有可能是细胞密度过大，无法展开的原因，可通过降低传代密度来改善。

常/见/问/题

问：4T1细胞培养基DMEM是高糖吗

是的，4T1细胞培养用的是高糖DMEM

问：4T1细胞形态特征

4T1细胞形态特征为上皮细胞样，贴壁生长

问：小鼠4T1细胞传代后不长

这些因素都会影响细胞长得慢

1.没有保证密度，细胞长不起来，可以先培养，然后消化重新铺瓶，提高密度培养

2.操作时力度没控制好，将细胞吹碎，状态变差

3.血清质量不好，影响细胞生长

问：4T1细胞能成瘤吗

Yes，forms tumors and metastasizes in BALB/c mice.

问：4T1细胞培养出现小黑点

如果在显微镜下观察到了小黑点，基本上可以将范围缩小到是细菌污染或者细胞碎片这两种情况。

到底是污染还是碎片，可从以下几个方面进行判断：

1) 运动性

很多会动的小黑点，只是发生布朗运动的细胞碎片。在显微镜下观察黑点大小和形状是否规则，是否运动，是做布朗运动还是呈直线型快速移动。如果黑点大小不规则，做布朗运动，黑点可能是细胞碎片（可能是细胞状态不佳或者消化过度引起的），也可能是血清反复冻融产生的蛋白沉淀引起的，也可能是细胞的代谢产物。

处理方法：消化离心弃上清后，PBS重悬洗洗，750rpm低速离心4分钟，重新铺下，铺回去镜下观察一下是不是干净的

如果黑点大小一致，快速移动，很可能是细菌污染。

2）培养基的浑浊度

细胞培养基对于细菌来说是非常营养的大餐。一旦发生污染，细菌就会大量繁殖。培养基PH值迅速下降，培养基变黄且会变浑浊。通常在12小时内就可以发现，而在48小时内就非常明显。

问：4T1细胞DMSO冻存比例

冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配

        或无血清细胞冻存液（无需程序性降温）